电转化感受态细胞原理
电转化感受态细胞原理如下：电转化法是利用瞬间高压在细胞上打孔，因而需用冰冷的超纯水多次洗涤处于对数生长前期的细胞，以使细胞悬浮液中应含有尽量少的导电离子。转化效率为109～1010 转化子/µg DNA；对于热激法，是利用冰冷的CaCl2处理对数生长期的细胞，可以诱导其产生短暂的“感受态”，易于摄取外源DNA。转化效率为106 ～107转化子/µg DNA。电转化法制备大肠杆菌感受态细胞的实验步骤1、前夜接种受体菌（DH5a或DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜。2、取2ml过夜培养物转接于200ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养至OD600＝0.6（约2.5-3小时）。3、将菌液迅速置于冰上。以下步骤务必在超净工作台和冰上操作。注意的事项细菌的生长状态：实验中应密切注视细菌的生长状态和密度，尽量使用对数生长期的细胞（一般通过检测OD600来控制。DH5a菌株OD600为0.5时细胞密度是5×107/ml）；所有操作均应在无菌条件和冰上进行。
电转化感受态细胞步骤
电转化感受态细胞步骤如下所示：1、由-80摄氏度冰箱中保存的菌落划单菌落，过夜培养大约16-20小时，将新鲜的单菌落接种于5ml的SOB培养基的试管中，在37摄氏度180r/min震荡培养过夜。2、取培养物500微升转接入含50mlSOB培养基的500ml摇瓶中，在200r/min37摄氏度下振荡培养至OD600约为0.5，将细菌培养物置于冰水混合物中骤冷半小时。3、用预冷的50ml离心管于4摄氏度5000r/min下离心五分钟，再收集菌体，将上清液弃去。4、用预冷的水轻轻重悬菌液，先加入少量水重悬菌体，然后把水加满，在4摄氏度5000r/min下离心五分钟，弃上清液。5、再用10%甘油重复步骤四两遍，在4摄氏度5000r/min下离心五分钟，最后一次倒尽上清液后，用残存管底的甘油悬浮细胞。6、分装100微升到数个Eppendorf管中，然后放入液氮中进行中速冻，并保存于-80摄氏度下的冰箱中。