什么是ctDNA?
早在1948年,研究发现细胞核内的DNA并非一直躲在核内,有些会出来逛逛,所有游离在血液中的DNA统称为cfDNA(cell-free DNA),而来自肿瘤细胞的cfDNA就是ctDNA。
到了1994年,科学家通过识别ctDNA身上携带的肿瘤特异性的基因突变,便可以准确的区分它来自肿瘤细胞还是正常细胞。
ctDNA在哪些方面可以应用
目前最新的ctDNA活检技术,不但可以抓取ctDNA,还可以进行定量分析它在血液中的含量,这项技术可以应用在肿瘤早筛及肿瘤治疗领域。
在定量分析方面,研究同一肿瘤患者ctDNA含量的变化发现,它的含量与肿瘤进展、药物疗效、转移复发等密切相关,相信随着研究的发展,数据库增大,必然能在肿瘤早筛、疗效监测、复发预警等方面发挥关键作用。
另外,在肿瘤靶向治疗方面,科学家针对肿瘤特异性位点开发了很多靶向药物,它们只攻击肿瘤细胞,对正常细胞伤害极小,液体活检在减少组织活检给患者带来的疼痛及风险同时,还能分析出体内肿瘤药物靶点的信息,可以大大地提高靶向药物的治疗效果。
什么是ctDNA,dsDNA,ssDNA,cDNA
循环肿瘤DNA(ctDNA),是指肿瘤细胞体细胞DNA经脱落或者当细胞凋亡后释放进入循环系统,随着基因测序的飞速发展,目前,已能在血液中对其进行检测并计数。ctDNA来自肿瘤细胞的体细胞突变,不同于遗传突变的是其存在于体内每个细胞。因此,ctDNA是一种特征性的肿瘤生物标记物,并且还可以被定性、定量和追踪。http://www.biodiscover.com/news/research/115466.html;
dsDNA:双链DNA,double-stranded DNA;
ssDNA:单链DNA,single-stranded DNA;
cDNA:互补DNA,complementary DNA,是以mRNA分子为模板,合成的一条与mRNA序列互补的单链DNA。
CTDNA是什么
CTDNA就是游离DNA
游离 DNA试剂盒中裂解液和洗脱液经过多次优化,能高效地分离 DNA。BIOG游离 DNA纯度高,最大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染,可以直接应用于 PCR、荧光定量 PCR和各种酶切试验等。
BIOG操作步骤
1. 请自行准备:无水乙醇、1.5mL 离心管。
2. 取出洗涤液,按以下操作:
a) 洗涤液 A:21mL 加入 9mL 无水乙醇,混匀;42mL 加入 18mL 无水乙醇,混匀。
b) 洗涤液 B:9mL 加入 21mL 无水乙醇,混匀;18mL 加入 42mL 无水乙醇,混匀。
c) 配制好的洗涤液如出现沉淀,可在 37℃溶解,摇匀后使用。
3. 取 1.5mL 离心管,加入 200μL 样本,4μLDNACarrier 混合均匀,加入 300μL 裂解液及 20μL 消化液,振荡混匀,56℃水浴 10 分钟。
4. 加入 1mL 无水乙醇,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响 DNA 的提取与后续实验。
5. 将吸附柱放入收集管内,将 760μL 上述溶液转入吸附柱内,静置 2 分钟,12,000 rpm 4℃离心 1 分钟,弃收集管内废液;
6. 将吸附柱放回收集管内,将剩余 760μL 溶液转移至吸附柱内,重复步骤 5。
7. 将吸附柱放回收集管内,加 500μL 洗涤液 A 至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心 1 分钟,弃收集管内废液。
8. 将吸附柱放回收集管内,加 500μL 洗涤液 B 至吸附柱内,静置 2 分钟,12,000 rpm 4℃离心 1 分钟,弃收集管内废液。
9. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4℃离心 2 分钟,离去残留的洗涤液。
10. 取出吸附柱,放入新的 1.5 mL 离心管内,加入 30-50 μL 洗脱液,静置 3 分钟,12,000 rpm 4℃ 离心 2 分钟,收集 DNA 溶液。提取的
DNA 即可用于下一步实验或-20℃保存。
注意事项:
1. 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛,请立即用
清水或生理盐水冲洗,必要时请就医。2. 裂解液如有白色絮状物析出属正常现象,置于 37℃水浴中溶解即可。
什么是ctDNA?
早在1948年,研究发现细胞核内的DNA并非一直躲在核内,有些会出来逛逛,所有游离在血液中的DNA统称为cfDNA(cell-free DNA),而来自肿瘤细胞的cfDNA就是ctDNA。 到了1994年,科学家通过识别ctDNA身上携带的肿瘤特异性的基因突变,便可以准确的区分它来自肿瘤细胞还是正常细胞。 ctDNA在哪些方面可以应用 目前最新的ctDNA活检技术,不但可以抓取ctDNA,还可以进行定量分析它在血液中的含量,这项技术可以应用在肿瘤早筛及肿瘤治疗领域。 在定量分析方面,研究同一肿瘤患者ctDNA含量的变化发现,它的含量与肿瘤进展、药物疗效、转移复发等密切相关,相信随着研究的发展,数据库增大,必然能在肿瘤早筛、疗效监测、复发预警等方面发挥关键作用。 另外,在肿瘤靶向治疗方面,科学家针对肿瘤特异性位点开发了很多靶向药物,它们只攻击肿瘤细胞,对正常细胞伤害极小,液体活检在减少组织活检给患者带来的疼痛及风险同时,还能分析出体内肿瘤药物靶点的信息,可以大大地提高靶向药物的治疗效果。 但检测ctDNA在技术上有难度 第一,ctDNA身形极小,而且在血液中的含量根据肿瘤的严重程度不等,尤其在肿瘤早期,含量会低到0.1%甚至以下,很难抓到。 第二,即使抓到,ctDNA擅于伪装,与正常DNA片段差异很小,可以藏匿在众多正常DNA片段中,难以辨别。 因此,ctDNA液体活检技术的应用需要不断提高实验技术质量,将更低含量的ctDNA抓取到,同时还需要强大的分析能力,在夹杂着测序错误的海量数据中精准辨别。肿瘤早筛的应用最关键的还在于数据库的积累,在临床可以治疗的最早期及时发现肿瘤并予以处理,才真正能实现肿瘤早发现,早治疗。关注我们:搜索微信公众号“癌度”,了解更多关于肿瘤和基因的资讯。转载文章请注明来源公众号及作者